GB/T14701-2019饲料中维生素B2的测定内容是什么?百检网检测范围广泛，可根据客户需求选择合适的检测标准及项目安排检测，全国近千家合作实验室，CMA/CNAS资质齐全，可就近安排寄样检测。今天百检网就给大家简单介绍一下GB/T14701-2019饲料中维生素B2的测定标准内容。

1 范围

本标准规定了饲料中维生素B2(即核黄素C17H20N10)测定的荧光分光光度法和高效液相色谱法。

本标准方法1适用于动物性和植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中维生素B2的测定，定量限为0.25mg/kg。

本标准方法2适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料中维生素B2的测定，以荧光检测器检测时，定量限为5mg/kg;以紫外检测器检测时，定量限为10mg/kg。

浓缩饲料中维生素B2的测定，方法1为仲裁法；维生素预混合饲料、添加剂预混合饲料中维生素B2的测定，方法2中的高效液相色谱荧光检测器方法为仲裁法。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 14699.1 饲料采样

GB/T 20195 动物饲料试样的制备

3 方法1 荧光分光光度法

3.1 原理

维生素B2(核黄素)在440nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素含量成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与荧光强度的比值计算样品中维生素B2的含量。

3.2 试剂或溶液

除非另有说明，所用试剂均为分析纯试剂，水为蒸馏水，符合GB/T 6682 中三级用水或相当纯度的水。

3.2.1 氢氧化钠溶液：0.05mol/L。

3.2.2 氢氧化钠溶液：1.0mol/L。

3.2.3 盐酸溶液：0.1mol/L。

3.2.4 盐酸溶液：1.0mol/L。

3.2.5 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)。

3.2.6 高锰酸钾溶液：40g/L。

3.2.7 冰乙酸。

3.2.8 冰乙酸溶液，0.02mol/L：将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000ml。

3.2.9 过氧化氢溶液，100mL/L，分析当天制备。

3.2.10 维生素B2标准溶液

3.2.10.1 维生素B2贮备液Ⅰ：称取在五氧化二磷干燥器里干燥24h的维生素B2标准品(纯度大于95%)25mg(*至0.0001g)于250mL棕色锥形瓶中，加入约200mL冰乙酸溶液(3.2.8)，在沸水浴中煮沸直至溶解，冷却后转移至250mL棕色容量瓶中，用冰乙酸溶液(3.2.8)稀释至刻度。滴加甲苯覆盖，2℃~8℃冰箱保存，保存期6个月。该溶液含0.1mg/mL维生素B2。

3.2.10.2 维生素B2贮备液Ⅱ：取维生素B2贮备液Ⅰ(3.2.10.1)10mL用冰乙酸溶液(3.2.8)稀释至100mL，置于棕色容量瓶中滴加甲苯覆盖，2℃~8℃冰箱保存，保存期3个月。该溶液中含10μg/mL维生素B2。

3.2.10.3 维生素B2标准工作液：取维生素B2贮备液Ⅱ(3.2.10.2)10mL，用水稀释至100mL，分析前制备。该溶液中含1μg/mL维生素B2。

3.2.11 荧光素标准溶液

3.2.11.1 荧光素贮备液：称取荧光素0.050g，用水稀释至1000mL，置于棕色瓶中2℃~8℃冰箱保存。该溶液中含50μg/mL荧光素。

3.2.11.2 荧光素标准工作液：取1mL荧光素贮备液(3.2.11.1)，用水定容至1000mL，置于棕色瓶中2℃~8℃冰箱保存。该溶液中含0.05μg/mL荧光素。

3.2.12 溴甲酚绿pH指示剂

取溴甲酚绿0.1g，加氢氧化钠溶液(3.2.1)2.8mL溶解，再加水稀释至200mL。变色范围pH3.6~5.2。

3.3 仪器设备

3.3.1 分析天平：感量0.0001g。

3.3.2 电热恒温水浴

3.3.3 具塞玻璃刻度试管：15mL。

3.3.4 荧光分光光度计。

3.4 试样制备

按GB/T 14699.1 的规定，选取具有代表性的样品至少500g，用四分法缩减至100g；按GB/T 20195 的规定制备样品，磨碎，通过0.425mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。

3.5 试验步骤

以下操作应避免强光照射。

3.5.1 试样溶液的制备

称取饲料原料、配合饲料、浓缩饲料1g~2g(*至0.001g)置于100mL棕色具塞锥形瓶中。加入65mL盐酸溶液(3.2.3)，于沸水浴中煮沸30min。在加热开始时，每隔5mi~10min摇动锥形瓶一次，以防试样结块。冷却至室温后，用氢氧化钠溶液(3.2.2)调节pH值至6.0~6.5，立即加盐酸溶液(3.2.4)使pH值调至4.5(溴甲酚绿指示剂变为草绿色)。转移至100mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度。通过中速无灰滤纸过滤，弃去*初5mL~lomL溶液，收集滤液于100mL棕色锥形瓶中。取整份清液，滴加稀盐酸检査蛋白质，如有沉淀生成，继续加氢氧化钠溶液，剧烈振摇使之沉淀完全。再次过滤作为待测试液。

3.5.2 杂质氧化

于a、b、c三支15mL刻度试管(3.3.3)中各吸入试样溶液(3.5.1)lomL，同时做平行，向试管a中加入水1mL，向试管b中加入维生素B2标准工作液(3.2.10.3)1mL。然后各加入冰乙酸(3.2.7)1mL旋摇混匀后逐个加高锰酸钾溶液(3.2.6)0.5mL，旋摇混匀，静置2min，再逐个加入过氧化氢溶液(3.2.9)0.5mL旋摇，使高锰酸钾颜色在10s内消退。加盖摇动，使气泡逸出。

3.5.3 测定

用荧光素标准工作液(3.2.11.2)调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。调整激发波长440nm，发射波长525nm，测定试管a、试管b的荧光强度，试样溶液在仪器中受激发照射不超过10s；在试管c中加入20mg连二亚硫酸钠(3.2.5)，摇动溶解，并使试管中的气体逸出，迅速测定其荧光强度作为荧光空白。若溶液出现浑浊，不能读数。

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